FAQs

Q: چرا با کیت A، کنترل منفیها مثبت کاذب میشوند اما با کیت B، مثبت کاذب مشاهده نمیشود؟

چرا با کیت A، کنترل منفیها مثبت کاذب میشوند اما با کیت B، مثبت کاذب مشاهده نمیشود؟ به منظور پاسخ به این سوال بهتر است ابتدا با انواع آلودگی در بخش مولکولی آشنا شویم. عمومیترین منشاءهای آلودگی به شرح ذیل است: 1-الگوی DNA اصلی (نمونه استخراج شده) 2-مولکولهای کلون شده که ژن هدف را حمل میکنند (مثل کنترل مثبت که پلاسمیدهای حاوی ژن هدف است) 3-امپلیکونها (مولکولهای تکثیر شده از PCR قبلی) 4- سایر منابع آلودگی: گاهی ممکن است نمونههای مورد بررسی با DNA انسانی آلوده شوند به این صورت که یک قطعه میکروسکوپی از پوست یا حتی شوره میتواند عامل آلوده کردن PCR باشد و به صورت بالقوه منجر به نتیجه نادرست گردد. جواب سوال: در نتیجه جواب مثبت کاذب کنترل منفی میتواند وجود امپیلیکونهای تکثیر شده با کیت A در محیط کار باشد که اگر کیت B پرایمرهایش قابلیت شناسایی این توالی را نداشته باشند با کیت B نتایج مثبت کاذب حذف میشود. در چنین شرایطی بهتر است برای مدت کوتاهی از کیت تشخیصی استفاده کنید که توالیهای هدف آن متفاوت از کیت قبلی باشد.

Q: چگونگی تفسیر پیکهای کنترل مثبت

چگونگی تفسیر پیکهای کنترل مثبت Positive Control حاوی الگویی با قدرت تکثیر بالا میباشد که شامل ناحیه تکثیر شونده توسط پرایمرهای ژن هدف است. هدف کنترل مثبت بررسی عملکردی بودن و اطمینان از صحت اضافه شدن تمامی واکنشگرها میباشد. اگر P.C وارد مرحله استخراج شود، صحت کار استخراج و تکثیر بررسی میشود ولی اگر وارد مرحله استخراج نشود، فقط صحت مرحله تکثیر بررسی میشود. در هر سری کاری استفاده از یک کنترل مثبت الزامی میباشد اما بهتر است که نمونه کنترل مثبت به عنوان آخرین نمونه به ویالهای واکنش اضافه شود. زیرا اضافه کردن این نمونه در اول کار میتواند عامل انتقال آلودگی به سایر ویالها باشد. اگر کنترل مثبت پیک ندهد و یا پیک با CT بالا داشته باشد نمیتوان به جوابهای منفی مطمئن بود. چون همانطور که گفته شد کنترل مثبت قدرت تکثیر بالا دارد و عدم وجود پیک مناسب در این نمونه میتواند دال بر ضعف در مراحل تکثیر باشد. پس پیشنهاد میشود نمونههای منفی این سری کاری مجدد در یک سری کاری جدید مورد بررسی قرار گیرد.

Q: چگونه برای یک نمونه wart، تست HPV انجام شود؟

چگونه برای یک نمونه wart، تست HPV انجام شود؟ نکات نمونهگیری از wart: برای برداشت نمونه، زگیلهای گلکلمی و زگیلهای flat تیره در اولویت نمونهگیری هستند. برداشت نمونه wart باید با استفاده از تیغهای یکبار مصرف استریل انجام شود. قبل از انجام نمونهگیری باید مطمئن شد که شرح حال کاملی از مراجعهکننده گرفته شده است؛ زیرا ممکن است الزام به نمونهگیری از دهان، حلق و مقعد نیز وجود داشته باشد. نکات انتقال نمونه: نمونه گرفته شده از بانوان در محیط مخصوص پاپ اسمیر قرار داده شود. نمونه آقایان بایستی در محلول PBS گذاشته شود. دقت شود که محیطهای انتقال فاقد فرمالین باشد. نکات استخراج: برای استخراج از wart بایستی از کیتهای مخصوص استخراج از بافت نظیر کیت Genomic Extraction استفاده کرد. نمونه به دست آمده از wart بایستی به دو قطعه تقسیم شود؛ یک قطعه آن استخراج گردد و قطعه دیگر در میکروتیوب استریل در دمای °20 سانتی گراد به عنوان نمونه استوک نگهداری گردد.