کیت تشخیصی کمیHBV(50rxn) با متد Real-Time PCR
کیت حاضر جهت تشخیص میزان DNA ویروس HBV در نمونههای پلاسما، سرم و خون کامل انسانی طراحی شده است که با تکنیک One step Real-Time PCR انجام میگردد. کنترل داخلی مورد استفاده در این کیت، Beta actin به صورت اندوژن میباشد.
ملاحظات
* محتویات کیت باید در دمای -۲۰°C نگهداری شود.
* از ذوب و انجماد مکرر کیت جدا خودداری گردد. ذوب و انجماد بیش از ۵ بار منجر به کاهش حساسیت محتویات کیت جهت ارزیابی نتایج میگردد. محتویات کیت بر روی یخ یا در دمای ۴°C ذوب گردد.
* اجزای کیت تا زمان اتمام تاریخ انقضای کیت (در صورت نگهداری در دمای -۲۰°C) پایداری داشته و ماندگاری کیت از زمان تولید، بمدت ۱۲ ماه می باشد.
مرحله Real-Time PCR
جدول ۱- جزئیات مربوط به پروبهای فلوئورسنت
| Channel | Target |
| FAM | HBV Spike Protein Gene |
| TEXAS Red/ROX | Human Beta-Actin |
جدول۲- اجزای واکنش
| Volume(µl) | Reagent |
| ۱۵ | Master Mix |
| ۱.۵ | Primer & Probe Mix |
| ۳.۵ | Nuclease Free Water |
| ۱۵ | St/ DNA samples |
| ۳۵ | Total |
* در صورت انجام استخراج نمونه با کیتهای دارای تاییدیه CE-IVD، EU، FDA، دستیابی به نتایج صحیح توسط کیت حاضر امکان پذیر میباشد( DNA در ۳۰-۴۰µl الوشن بافر حل شود).
* ترجیحا از DNA تازه استخراج شده و یا ذخیره شده در شرایط مناسب ، استفاده شود.
برنامه دمایی Real-Time PCR
جدول ۳. برنامه دمایی سیکلها
| Cycle | Quantitation | Time | Temp(°C) | Steps |
| ۱ | Off | ۲ min | ۹۵ | Denaturation |
| ۴۵ | Off | ۱۵ sec | ۹۵ | PCR and |
| On | ۳۰ sec | ۵۸ | Quantitation |
پارامترهای کنترل نمودار استاندارد
| Valid Values | Control parameters |
| -۳.۰۰/۳.۷۴ | Slope |
| ۸۵%/۱۱۵% | PCR efficiency |
| ۰.۹۵-۱.۰ | R square(R²) |
تفسیر نتایج
| نتایج ارزیابیHBV | HBV genes |
| نتایج قابل قبول با درصد اطمینان > 95% میباشد. | HBV DNA> 32 IU/mL |
| نتایج غیرقابل قبول | HBV DNA< 32 IU/mL |
| DNA ویروس HBV قابل شناسایی نیست. | عدم تکثیر تارگت HBV |
* نتایج استانداردها به صورت IU/ml گزارش میشوند. لذا باید نتایج نهایی نمونهها منطبق با استانداردها بوده و تبدیل واحد مطابق فرمول زیر انجام شود:
