کیت تشخیصی کمی HIV با متد Real-Time PCR(20rxn)
کیت حاضر جهت تشخیص میزان RNA ویروس HIV در نمونههای پلاسما، سرم و خون کامل انسانی طراحی شده است که با تکنیک One step Real-Time PCR انجام میگردد. کنترل داخلی مورد استفاده در این کیت، Beta actin بهصورت اندوژن میباشد. پرایمرها و پروبهای بکاررفته در این کیت اختصاصی تمامی ژنوتایپهای HCV میباشند.
حساسیت
حد پایین خوانش کیت (LoD) 20 IU/ml معادل ۱۱.۶ copies/ml با درصد اطمینان ۹۵% میباشد.
اختصاصیت
با توجه به اختصاصیت پرایمرهای طراحی شده ، اختصاصیت نتایج ۱۰۰% میباشد.
ملاحظات
مرحله Real-Time PCR
جدول ۱- جزئیات مربوط به پروبهای فلوئورسنت
| Channel | Target |
| Cy5 | HIV Polyprotein Gene |
| TEXAS Red/ROX | Human Beta-Actin |
جدول۲- اجزای واکنش
| Volume(µl) | Reagent |
| ۱۵ | Master Mix |
| ۱.۵ | Primer & Probe Mix |
| ۳.۵ | Nuclease Free Water |
| ۱۵ | St/ RNA samples |
| ۳۵ | Total |
برنامه دمایی Real-Time PCR
جدول ۳. برنامه دمایی سیکلها
| Cycle | Quantitation | Time | Temp(°C) | Steps |
| ۱ | Off | ۲۰ min | ۴۵ | Reverse Transcriptase |
| ۱ | Off | ۲ min | ۹۵ | |
| ۴۵ | Off | ۱۵ sec | ۹۵ | PCR and |
| On | ۳۰ sec | ۵۸ | Quantitation |
پارامترهای کنترل نمودار استاندارد
| Valid Values | Control parameters |
| -۳.۰۰/۳.۷۴ | Slope |
| ۸۵%/۱۱۵% | PCR efficiency |
| ۰.۹۵-۱.۰ | R square(R²) |
تفسیر نتایج
| نتایج ارزیابیHIV | HIV genes |
| نتایج قابل قبول با درصد اطمینان > 95% می باشد. | HIV RNA> 85 IU/mL |
| نتایج غیرقابل قبول | HIV RNA< 85 IU/mL |
| RNA ویروس HCV قابل شناسایی نیست. | عدم تکثیر تارگت HIV |
